发表刊物：动物医学进展 . 2025 ,46 (09)

摘要：为建立针对鸡星状病毒(CAstV)的实时荧光逆转录重组酶介导核酸等温扩增(RT-RAA)检测方法，基于CAstV的ORF1b基因序列设计引物和探针。通过试验筛选，确定最优的引物和探针组合，并对反应条件进行优化。利用优化好的反应条件进行特异性、敏感性和重复性测试。针对从广西南宁不同地区采集的200份临床样品进行检测，并将结果与RT-PCR和RT-qPCR进行对比。结果显示，建立的实时荧光RT-RAA方法能在20 min内完成反应，最佳反应温度为41℃,显示出极高的灵敏度，最低检测限达到1.4×10～1 copies/μL,比普通RT-PCR高100倍。所设计的引物特异性高，仅能扩增出CAstV病毒，而对其他病原体无交叉反应。重复性试验结果表明该方法具有良好的稳定性。与RT-qPCR相比，实时荧光RT-RAA的检测结果符合率高达98.27%,而普通RT-PCR与RT-RAA相比符合率仅为82.45%。建立了一种高效、快速、准确、灵敏且特异性强的实时荧光RT-RAA方法，适用于CAstV的临床大规模鉴别检测，为CAstV感染的监控提供了技术支持。