1.技术原理：针对当前防控PED的评估其疫苗免疫保护效果的实际需要，建立一种快速、灵敏、特异的检测PEDV S蛋白中和抗体的间接ELISA技术并组装成试剂盒，与常规中和试验测定PEDV中和抗体法或其它相关试剂盒进行平行比对，并对广西猪群PED血清临床样本进行初步血清学检测分析，为评估PEDV疫苗的免疫保护效果及指导搞好PED防控工作提供可靠的技术和产品，以促进我区养猪业的健康可持续发展。

        2.性能指标：猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea Virus, PEDV）引起的一种高度接触性的急性传染病。猪流行性腹泻病毒(PEDV)是单链正股RNA病毒，在遗传分类上属于套式病毒目冠状病毒科冠状病毒属｡ PEDV基因组共编码 4 种主要结构蛋白，即核衣壳蛋白( N )、包膜蛋白( E )､膜蛋白( M )和纤突蛋白(S )｡ S蛋白位于病毒粒子表面，由1383个氨基酸组成，分为两个功能区即S1 (1-789 aa)和S2 (790-1383 aa)，S蛋白在介导病毒粒子进入细胞和诱导机体产生中和抗体的过程中起到关键作用。中和抗体检测是评估疫苗免疫保护效果的主要依据。但目前尚缺乏一种快速、灵敏、特异的PEDV中和抗体检测方法。传统的中和试验测定法虽可靠，但耗时长、操作难度大。ELISA技术操作简便易标准化而获得广泛应用，但以PEDV全病毒或者N、M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法所测定的PEDV抗体并不能真实的反映猪体免疫保护力。而S蛋白上存在多处线性抗原表位和中和表位，在诱导机体产生中和抗体的关键抗原，因此基因S蛋白的间接ELISA方法可以反映动物机体的免疫保护状态。

       本发明利用免疫信息学技术筛选PEDV S基因部分抗原性强的区域（S2A），通过PCR扩增S2A，构建原核表达质粒pET32a-S2A并进行原核表达，研究原核表达的重组蛋白S2A的免疫原性和反应原性。纯化重组蛋白S2A作为包被抗原建立PEDV抗体ELISA检测技术，组装成试剂盒进行初步应用。本发明建立的PEDV抗体间接ELISA检测方法，能够检测母猪乳汁中或血清中的PEDV抗体水平，更好的反应猪体免疫保护力，评估疫苗的免疫效果。