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【学术论文】猪鼻支原体重组酶介导等温扩增快速检测方法的建立和初步应用

发布时间:2025-09-22 09:03:52 浏览量:89

徐悦1,2段群棚2赵硕1,2吴先华3张胜斌4马青兰3张扬祖4金宣讲3覃秀珍4冯明3卢冰霞2许心婷2全琛宇2何颖2胡庭俊1

1.广西大学动物科学技术学院2.广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)G东盟跨境动物疫病防控重点实验室3.广西农垦永新畜牧集团新兴有限公司4.广西农垦永新畜牧集团西江有限公司

发表刊物:动物医学进展 . 2025 ,46 (10) 

摘要:为了建立一种高效、便捷的猪鼻支原体(Mhr)的新型检测方法,基于Mhr的P37基因设计了2对特异性引物,通过优化反应体系和条件,成功建立了一种Mhr的重组酶介导等温扩增技术(RAA)检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行评估,并使用该检测方法对64份疑似或确诊Mhr的临床样品进行初步检测应用。结果显示,建立的RAA检测方法可于24℃恒温条件下,在20 min内完成对Mhr核酸的扩增,且与Mhp、SIV、APP、HPS、PRRSV等其他猪主要呼吸道疫病病原核酸均无交叉反应,特异性好;该方法对Mhr核酸的最低检出限为1.25×10-4 copies/μL,灵敏度高;选择阳性质粒扩增3次,均有清晰条带,重复性好;应用该方法检测了64份疑似呼吸道疫病阳性的猪鼻拭子样本,Mhr阳性率为48.43%(31/64),与实验室已建立的Mhr及猪肺炎支原体的TaqMan双重荧光PCR方法的检测结果一致。成功建立了用于Mhr的RAA检测方法,该具有特异、敏感、反应快速、操作简便的特点,适合养殖场及基层实验室对Mhr的早期初步鉴别检测。

关键词:

猪鼻支原体;重组酶介导等温扩增;鉴别检测;

基金资助:

国家现代农业产业技术体系广西创新团队建设专项资金资助项目(nycytxgxcxtd-2023-15-02); 南宁市科技重大专项(20232039); 广西基本科研业务费专项(23-4); 广西兽医生物技术重点实验室开放研究课题(23-035-32-B-01); 广西农业科技自筹经费项目(Z2023033,Z202222,Z2023034);

  • DOI:

    10.16437/j.cnki.1007-5038.2025.10.001

  • 专辑:

    农业科技

  • 专题:

    畜牧与动物医学

  • 分类号:

    S858.28

  • 在线公开时间:

    2025-09-18 16:31