目前监测耐药基因的方法很多,如PCR技术、核酸杂交技术、基因芯片技术、质粒指纹图谱、DNA序列测定技术等,其中单重PCR以及基于PCR技术衍生出的多重PCR的研究报告最多,也具有一定的应用前景。PCR技术具有操作简便、快速、特异性强和敏感性高等优点,但它检测的基因比较单一;多重PCR可同时检测几种目的基因,但需几对引物组合在一起同时竞争性扩增,引物之间会产生相互干扰,多增加一对引物,敏感性就相应降低。此外,PCR产物需通过琼脂糖电泳才可观察结果,该电泳难以区分50bp-100bp以内的条带,难以达到高通量检测目的。多重荧光PCR由于探针要标记不同发光波长的荧光基团,如标记太多的荧光基团,相互会产生干扰。核酸杂交技术、基因芯片技术、质粒指纹图谱、DNA序列测定等其他技术具有特异性好的特点,可操作过程繁琐,价格昂贵,远不能满足临床需要,还需要大量的研究来克服目前分子生物学方法应用于临床的不足。因此,目前急需建立一种同时可检测多种细菌耐药基因的高通量快速检测方法。
GeXP 系统(Gene Expression Profiler Genetic Analysis System) 是美国Beckman Coulter 公司研发的用于研究多基因表达定量分析的平台。GeXP多重PCR 扩增采用荧光标记通用引物和特异性嵌合引物(即基因特异性引物5’端连接通用引物序列)相结合引发多重体系扩增。该技术可同时对30种目的基因进行检测分析,从而实现真正意义上的高通量检测鉴别多种耐药基因的目的。
本发明公开了同时鉴别磺胺类抗生素耐药基因的GeXP多重PCR检测引物组,在此基础上,发明人进一步建立了相应GeXP快速检测方法及其试剂盒。实验证明,使用本发明具有简便快速、特异性强、灵敏度高等特点,与药敏试验、测序等实验方法的鉴定结果相比,符合率达100%。因此,本发明为常见的磺胺类耐药基因的检测提供了简便、高通量的检测试剂盒和检测体系,更符合实际的需要。本发明研究从基因上了解广西地区细菌对磺胺类抗生素的耐药情况,为调查耐药基因流行趋势提供一种全新的技术手段,应用前景广阔。