中国兽医科学
尹文巧1,2谢芝勋2张艳芳2范晴2谢志勤2罗思思2谢丽基2李孟2吴嫒琼2李小凤2
1.广西大学动物科学技术学院2.广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室
摘要:为建立一种快速鉴别诊断禽偏肺病毒B型(aMPV/B)和禽偏肺病毒C型(aMPV/C)的方法,根据aMPV/B和aMPV/C的保守基因片段,设计引物和荧光探针,通过优化探针浓度和反应温度,建立检测aMPV/B和aMPV/C的二重逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法。结果显示,aMPV/B和aMPV/C最佳探针浓度均为0.24 μmol/L,最佳反应温度为64 ℃;特异性结果显示,该二重RT-LAMP方法能特异性检测aMPV/B和aMPV/C,对禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)等12种常见禽源病原体扩增呈阴性;敏感性和干扰性结果显示,该二重荧光RT-LAMP方法检测aMPV/B和aMPV/C的敏感性均比普通RT-PCR高10倍,且抗干扰性良好;重复性结果显示,aMPV/B和aMPV/C二重荧光RT-LAMP方法的批内和批间重复性变异系数均小于3%;对临床样品检测结果显示,建立的二重RT-LAMP与RT-PCR检测结果高度相符。综上,本研究成功建立了二重可视化RT-LAMP检测方法,可为临床aMPV/B和aMPV/C防控提供技术支持。
关键词:禽偏肺病毒;环介导等温扩增;可视化;鉴别诊断;
基金资助:广西科技基地和人才专项(桂科AD17195083); 国家现代农业产业体系广西家禽产业创新团队项目(nycytxgxcxtd-2024-19); 广西重点研发计划项目(桂科AB25069499); 广西八桂学者专项(2019A50);
DOI:10.16656/j.issn.1673-4696.2025.0206
专辑:基础科学;农业科技
专题:生物学;畜牧与动物医学
分类号:S852.65
在线公开时间:2025-06-11(知网平台在线公开时间,不代表文献的发表时间)